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天然生物发酵食品添加剂

 

焙烤食品/熟肉制品/果蔬汁类可用于寿司、饮料、米饭、糕点、面点、酱类、肉制品、罐头等的防腐保鲜。

 

新型广谱杀菌抑菌剂——ε-聚赖氨酸
    公司简介:
    樟树市狮王生物科技有限公司总部坐落于中国药都——樟树,是一家以研制、开发、生产、经营天然绿色食品添加剂、医药中间体、化肥添加剂以及饲料天然添加剂为主的科技型企业。公司占地66000平方米,建有现代化生产基地,厂区绿草如茵,环境优雅。
    产品简介:
    ε-聚赖氨酸(ε-poly-L-lysine,简称ε-PL)是一种由白色链球菌(Streptomyces albulus)发酵生产的含有25~30个L-赖氨酸残基的同型单体聚合物,由人体必需氨基酸L-赖氨酸的ε-氨基与另一L-赖氨酸的α-羧基形成ε-酰胺键连接而成,ε-PL最早是由日本科学家发现的。
    食品添加剂使用标准(GB2760-2011)中聚赖氨酸已经是国家规定可添加的安全生物食品添加剂,它比化学性添加剂更安全,抑菌效果更好,在体内代谢为有益于人体的氨基酸。在日本、美国已经普遍使用,中国食品企业也已经开始使用并且逐年增加。由于国家越来越重视食品安全,如何选择食品添加剂、选择哪种才让产品更安全、消费者更满意,是我们做食品的企业关注的。
    1.1 理化性质
    ε-聚赖氨酸为淡黄色粉末、吸湿性强,略有苦味,是赖氨酸的直链状聚合物。它不受pH值影响,对热稳定(120℃,20min),能抑制耐热菌,故加入后可热处理。与盐酸、柠檬酸、苹果酸、甘氨酸和高级脂肪甘油酯等合用有增效作用。分子量在3600—4300之间的ε-聚赖氨酸其抑菌活性最好,当分子量低于1300时,ε-聚赖氨酸失去抑菌活性。由于聚赖氨酸是混合物,所以没有固定的熔点,250℃以上开始软化分解。ε-聚赖氨酸溶于水,微溶于乙醇。对其表征进行红外光谱分析表明:在1680~1640cm -1和1580—1520cm-1有强吸收峰。
    1.2 ε-聚赖氨酸的特点
    ɛ-聚赖氨酸(ε-PL) 具有广谱抑菌性,对革兰氏阳性和阴性菌如枯草杆菌、乳酸菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌等的繁殖有强的抑制作用,对酵母菌和霉菌也有一定的抑制作用。作为防腐剂,ε-PL具有安全性能高、在水中的溶解性极强、热稳定性好、使用范围广等优点,在中性和微酸性环境条件均有较强的抑菌性(表3)。由于对热稳定,故加入后可热处理(表4),因此还能抑制一些耐热性芽孢杆菌等,另外,ε-PL对一些呈蝌蚪状的非收缩性长尾噬菌体也有抑制作用 。
表1  ε-PL和其它两种天然防腐剂的比较
抑菌剂 乳酸链球菌素 纳他霉素 聚赖氨酸
抗菌谱 比较窄,只能杀死或抑制G+,对G-和酵母菌无效 窄,只能霉菌和酵母菌有很强的抑制效果,对细菌无效 抗菌谱广,能有效抑制G+/G-、霉菌和酵母菌等,对其他防腐剂不抑制的G-大肠杆菌、沙门菌的抑制效果很好,并且对一些耐热性芽孢杆菌和病毒也有一定抑制作用
热稳定性 PH2.5时, 115℃高压灭菌15min不失活性;PH5时,115℃失活40%;PH6.8时,115℃失活90% 能承受短暂高温(100℃),对紫外线、阳光较为敏感,氧化剂和重金属会影响其稳定性 可承受一般食品加工过程的热处理,80℃,热处理60min不失活性; 100℃,30min不失活性; 120℃,20min不失活性
使用PH范围 强酸性环境2-4 4-7 2-9
溶解性 PH2.5时,溶解度12%;PH5时,溶解度4%在中性和碱性条件下不溶于水 微溶于水、甲醇等,难溶于大部分有机溶剂。常温下在水中的溶解度为30-100mg/L 易溶于水和盐酸,不溶于乙醇、乙醚等有机溶剂

 

从表1可以看出,乳酸链球菌素和纳他霉素的抑菌谱都较窄,两者必须配合使用才能达到较好的抑菌效果。而聚赖氨酸在酸性和微酸性环境中对G+、G-、酵母菌、霉菌均有抑菌效果,对其他天然防腐剂不易抑制的G-的大肠杆菌、沙门氏菌抑菌效果非常好(表2),而且其对耐热性芽孢杆菌和一些病毒也有抑制作用。

 

表2 ε-PL抑制微生物生长的最小抑菌浓度
不同类型的微生物 菌  种 MIC / mg·L-1 环境pH
真菌(fungi) Aspergillus niger IFO4416  黑曲霉 250 5.6
  Trichophyton mentagrophytes IFO7522 须癣毛癣菌 60 5.6
酵母菌(yeast) Candida acutus IFO1912  假丝酵母 6 5.0
  Phaffia rhodozyma IFO10129  红发夫酵母 12 5.0
  Pichia anomala IFO0146 异常毕赤酵母 150 5.0
  Pichia  membranaefaciens IFO0577 膜醭毕氏酵母 < 3 5.0
  Rhodotorula lactase IFO1423  红酵母 25 5.6
  Sporobolomyces roseus IFO1037 掷胞酵母 < 3 5.0
  Saccharomyces cerevisiae  酿酒酵母 50 5.0
  Zygosaccharomyces rouxii IFO1130 鲁氏结合酵母 150 5.6
革兰氏阳性细菌(G+) Geobacillus stearothermophilus IFO12550 嗜热脂肪芽孢杆菌 5 7.0
  Bacillus coagulans IFO12583 凝固芽孢杆菌 10 7.0
  Bacillus subtilis IAM1069  枯草芽孢杆菌 < 3 7.3
  Clostridium acetobutylicum IFO13948 丙酮丁醇杆菌 32 7.1
  Leuconostoc mesenteroides IFO3832 肠系膜明串珠菌 50 6.0
  Lactobacillus brevis IFO3960 短乳杆菌 10 6.0
  Lactobacillus  plantarum IFO12519  植物乳杆菌 5 6.0
  Micrococcus luteus IFO12708 藤黄微球菌 16 7.0
  Staphylococcus aureus IFO13276 金黄色葡萄球菌 12 7.0
  Streptococcus lactis IFO12546 乳链球菌 100 6.0
革兰氏阴性细菌(G-) Raoultella planticola IFO3317 植生克雷伯菌 8 7.0
  Campylobacter jejuni 空肠弯曲菌 100 7.0
  Escherichia coli IFO13500 大肠杆菌 50 7.0
  Pseudomonas aeruginosa IFO3923 铜绿假单胞菌 3 7.0
  Salmonella typhymurium 鼠伤寒沙门氏菌 16 7 0
    可以看出,ε-PL 具有广谱抗菌性,其对细菌的最小抑菌浓度(MIC) 均小于100μg/mL ,对真菌其MIC相对要高一些。
表3 pH 对ε-PL的MIC的影响
试验菌种 MIC/ mg·L -1
  pH =5.0 pH =6.0 pH =7.0 pH =8.0
Bacillus subtilis 3.0 3.0 3.0 3.0
Bacillus cereus 25.0 100.0 50.0 12.5
Escherichia coli 25.0 25.0 50.0 50.0
Staphylococcus aureus 12.5 25.0 12.5 < 6.3
表4 热处理对ε- PL的MIC的影响
热处理方式 MIC/ mg·L-1
未处理 50
80 ℃,60 min 50
100 ℃,30 min 50
120 ℃,20 min 50
* 用大肠杆菌( E.coli) 进行试验
    因此,聚赖氨酸在抗菌谱和稳定性方面均优于其它两种防腐剂,而且使用成本低,已经成为新一代的天然抑菌剂。
抑菌机理
    ε-PL呈高聚合多价阳离子态,它能破坏微生物的细胞膜结构,引起细胞的物质、能量和信息传递中断,还能与胞内的核糖体结合影响生物大分子的合成,最终导致细胞死亡。
安全性
    ε- PL 作为食品的保鲜剂已有将近二十年的时间了, 研究表明,它具有较强的安全性。
    经慢性毒性和致癌性联合试验表明,每日摄取食物中的ε-PL含量在6500mgk/g,属于极安全的水平;在20000mg/kg,无明显的组织病理变化,也观察不到可能的致癌性。Hiraki等更用非常详细的毒理试验证实了ε-PL作为食品保鲜剂的高度安全性。他们用雄性或雌性老鼠进行急性毒性试验,实验分两组,均用ε-PL连续喂养14d,一组喂养量为每日5g/kg(ε-PL质量/老鼠体重),5min后,所有老鼠的情绪只受到轻微的影响,3~6h后恢复正常;而喂养量为每日1125~215g/kg的另一组老鼠,则观察不到任何毒性反应,两组老鼠的体重也没有差别,显示ε-PL对生长没有任何影响,急性毒性试验后进一步观察很长一段时间,发现所有老鼠的体重均没有受到影响,主要器官的病理检查也没有任何异常。用代谢活力缺陷的鼠伤寒沙门氏菌( Salmonella typhimurium) 等细菌进行回复试验也表明ε-PL 没有致突变性。90d喂养慢性毒理试验表明,每日摄取的食物中ε-PL 含量在10,000μg/ g (相当于895mg ε- PL /kg 雄鼠和995 mg/kg 雌鼠) 以下,属于极安全的水平。用14C 标志的ε-PL 进行ADME 试验(动物的吸收性、分布性、代谢性和排泄性试验) 也表明ε-PL 的安全性。根据美国FDA的标准,ε-PL 作为食品保鲜剂在米饭或寿司中的添加量为5~50μg/g ,以每人每天进食300g 米饭(加有50mg/kg 的ε-PL) ,一个60 kg 体重的人每天进食的ε-PL 量只有15mg ,因此ε-PL 作为食品保鲜剂是极安全的。
使用范围
    ε- PL 具有水溶性好、热稳定性和pH 使用范围广等特点,在各种不同条件下均可使用。
对食品风味的影响
    ε-PL 作为食品保鲜剂不影响食品风味,Yu-TingHo 等发现,由于耐热性好,ε-PL 加入食品中经过高温消毒能与右旋糖苷发生美拉德反应,且不仅能够保持抗菌效力,还有很强的乳化特性,甚至食品在pH7 和 1 mol/L NaCl 的环境下,这种乳化特性也不受影响,因此ε-PL 是具有乳化和保鲜双功能的食品添加剂。
ε-聚赖氨酸的应用
1、在食品上的应用
    ε-PL 最突出的特点在于广谱抗菌性而可用作食品保鲜剂,从肉类、家禽、海产品到面包、饼干等各种各样的食品,由于它天然又安全,符合消费者的健康需求。
    ε- PL 作为一种新型食品防腐剂除了单独使用外,还可以与其它食品添加剂混合使用, 如氨基乙酸、醋、乙醇、维生素、甘氨酸、十二磺酸硫胺素等, 并且混合使用后可以大大提高ε- PL 的抑菌能力。使用时加入食品或喷淋到食品表面, 均具有显著抗菌保鲜作用, 能杀死或抑制食品内部或表面致病微生物。如,酒精制剂:以含质量分数50%聚赖氨酸的糊精粉末为基础原料,添加体积分数30%~70%的酒精的制剂,主要用于各种蛋制品;醋酸制剂:添加体积分数0.5%~5.0%的醋酸,主要用于米饭,色拉等食品;甘油制剂:添加量为体积分数0.01%~5%,主要用于含有动物性蛋白乳蛋白较多的食品;甘氨酸制剂:添加量为质量分数0.01%一10%,和聚赖氨酸复合使用,协同抑菌效果更佳。
    1989 年日本在添加剂目录表中把ε- PL 归属于一种天然添加剂,并允许使用。以后韩国也允许作为食品添加剂使用。在美国和欧洲,主要是使用山梨酸作为防腐剂,但自2003 年7 FDA 已正式批准ε- PL 作为天然食品添加剂。
    另外,ε-PL还可以作为食品加工企业食品机械及容器较好的清洗杀菌剂。

 

表2  ε-聚赖氨酸在各种食品中的推荐使用量

 

食品种类 推荐用量
熟肉制品 香肠 0.25g/kg
西式火腿 0.25g/kg
生鲜畜肉 冷鲜肉 残留量小于0.05g/kg(表面处理)
冷冻肉 残留量小于0.05g/kg(表面处理)
饮料类 饮用纯净水 0.075g/l
果蔬饮料 0.2g/l
蛋白类饮料 0.15g/l
水基调味饮料 0.15g/l
茶、咖啡、植物饮料 0.2g/l
海水产品 鲜水产品 残留量小于0.1g/kg(表面处理)
冷冻水产品及其制品 残留量小于0.1g/kg(表面处理)
预制水产品 0.25g/kg
熟制水产品 0.25g/kg
焙烤食品 面包 0.1g/kg
中式糕点 0.15g/kg
西式糕点 0.15g/kg
乳及乳制品 纯乳 0.15g/l
稀奶油 0.2g/kg
干酪 0.2g/kg

 

建议用量
100ppm-500ppm